NanoBRET, NanoBiT解析（PPI解析）

NanoBRET検討用ベクター作製から解析まで受託を承っております。生物発光共鳴エネルギー転移(BRET : Bioluminescence Resonance Energy Transfer)は、生細胞におけるタンパク質間の直接的な相互作用を検出する手法として幅広く用いられています。類似の原理であるFRET(Förster resonance energy transfer)を用いた手法に比べて励起光を当てる必要がないので、バックグラウンド低減や細胞へのダメージを最小限に抑えることができます。

発光源に高レベル発光酵素NanoLucを用いたNanoBRETシステムは従来のウミシイタケルシフェラーゼを用いたBRETに比べ、より高い発光値と安定性、強固性を持ち、またHaloTag NanoBRET 618 fluorescent Ligandで標識されたHaloTagタンパク質をエネルギー転移アクセプターとして利用することで従来のBRETに比べて優れたS/B比が得られます。

NanoBiT検討用ベクター作製から解析まで受託を承っております。NanoLuc Binary Technology(NanoBiT)は生細胞内でタンパク質間の相互作用を構造的な相補性を利用して検出します。

NanoLucルシフェラーゼをベースに作製されたLarge BiT(LgBiT)およびSmall BiT(SmBiT)の各サブユニットは構造的な安定性を高め、親和性が低くなるように最適化されています。目的タンパク質とLgBiTまたはSmBiTとの融合体を哺乳動物細胞内で発現させ、目的のタンパク質が相互作用すると構造的相補性が促進され明るい発光酵素が形成されます。細胞透過性の基質を添加すると生細胞でタンパク質の動態をリアルタイムで観察することができます。