HaloTagクローンの各種実験受託

2つのタンパク質(PKCγ、PI3Kγ)の精製においてHaloTagの回収率および純度はFLAGタグおよびHisタグよりも優れていた。また、HaloTagで精製したキナーゼは活性も有していた。

パネルA） IκB-HaloTag融合タンパク質をHEK293細胞に一過的に発現させ、TMRリガンド(5 µM)で標識した。TNF-α(10 ng/ml)で刺激後、10分間隔で3時間まで観察を行った(図では 0、30、60、120分後の画像を示した)。TNF-αの刺激の30分前より10µMのLactacystinで処理することにより、分解が抑制された。

パネルB） 細胞の平均的な蛍光強度をオリンパスFV500ソフトウェアにより求め、時間0での蛍光強度を100として示している。