Flexi NanoLucタイプ

クローン関連、細胞関連実験受託(Flexi ORF Clone)Flexi NanoLucタイプ

哺乳類細胞内のイメージングからレポーターアッセイまでを高感度で実験したい方におすすめ。NanoLucは深海エビ（トゲオキヒオドシエビ[Oplophorus gracilirostris]）由来のルシフェラーゼで、発光レポーターとして最適なパフォーマンスを発揮するために改変された分子量19kDaの小さな発光酵素です。新規の基質Furimazineを用いることで発光強度と安定性を高め、ホタルやウミシイタケ由来ルシフェラーゼと比べて100倍以上の明るさを放つことが可能なルシフェラーゼです。

NanoLucルシフェラーゼの特長

非常に小さい単量体酵素(19.1kDa)
高い熱安定性(Tm=60℃)
広範なpH幅で活性を保持(pH 6-8)
翻訳後修飾、ジスルフィド結合がない
長時間発光

Flexi NanoLucタイプの特長

数十種類の異なるベクターから目的に適したNanoLucルシフェラーゼを選択可能
従来より100倍明るいルシフェラーゼとの発光タグ融合タンパク質を発現
高感度での検出を可能とするため、実際の生体システムに近い状態での観察を実現
pGL4ベースの構造により既存のプラスミドからの移し変えが容易
N末端融合/C末端融合のどちらでも選択可能
NanoLuc遺伝子コドンは最適化され、ほとんどの転写因子結合サイト、プロモーターモジュール、スプライスサイト
ならびにその他の調節配列を除去

アプリケーション例

標的タンパク質の生細胞発光イメージング
NanoLuc融合タンパク質の簡易可視化
細胞内タンパク質安定性試験
発現量リアルタイム検出解析
タンパク質-タンパク質相互作用解析（NanoBiT、NanoBRET）
タンパク質-リガンド相互作用解析

NanoLuc融合タンパク質の生物発光イメージング

NanoLuc融合プロテインキナーゼC発現HEK293細胞をPMA処理後、発光基質を添加してモニタリングした。（イメージングにはOlympus LV200 Bioluminescence Imagerを使用）

HalotagによるFlexiへの組み換え例

NanoBiT® とNanoBRET™ の特性比較

特性	NanoBRET™	NanoBiT®
方式	生物発光共鳴エネルギー転移（BRET）	発光酵素断片の相補性
検出対象	近接度	直接的な相互作用
タグの大きさ	小さい 20 kDa (NanoLuc®) と 30 kDa (HaloTag®)	非常に小さい 11アミノ酸（SmBiT）と 18 kDa（LgBiT）
データ	2波長の比率（低％CV）	RLU（相対発光強度）
試薬添加回数	2	1
検出機器(アッセイ)	BRET対応ルミノメーター（適合フィルター要）	ルミノメーター（フィルター不要）
検出機器(イメージング)	発光イメージングシステム（Olympus LV200など）：相互作用前後を観察可能	発光イメージングシステム（Olympus LV200など）：複合体のみ観察可能
可逆性（キネティックアッセイ可）	○	○
製品形態	キット（100種類以上）、クローニングベクター、検出試薬	クローニングベクター、検出試薬検出試薬の購入のみ
ライセンス費用（企業を含む）	試薬の購入のみ	試薬の購入のみ
その他	HaloTag®側を使ったプルダウン

NanoBRET・NanoBiT 受託サービス

■NanoBRET™ を始めるには

まず標的タンパク質にNanoLuc®とHaloTag® を付加しますが、最もBRET Ratioの高いコンストラクトを得るために8種類のコンストラクトを用意することを推奨します。弊社ではNanoBRET™コンストラクトの受託製造も承っており、確実なアッセイの実施をサポートしています。NanoBRET™コンストラクション受託サービスの詳細については、以下のサイト、または弊社までお問合せください。